Arbejde med proteiner

ELISA er en meget anvendt metode til bestemmelse af organisk stof. Metoden har den store fordel at den dels kan bestemme meget små stofmængder, samtidig med at den er meget specifik. I dette eksempel skal albuminindholdet
i en prøve bestemmes.

Albumin er et vigtigt protein i vores blod. Humanalbumin (albumin fra menneskeblod) vil være et fremmed stof for en kanin. Det er derfor muligt at lave et antistof, som retter sig mod humanalbumin, ved at sprøjte humanalbumin fra mennesker ind i en kanin. Antistofferne køber vi, da vi ingen kaniner har. 

Trin 1.
En mikrotiterplade med 96 små brønde af plast coates = fyldes med antistof (0antihumanalbumin). Antistoffet vil klæbe til væggene i brøndene. Brøndene står med antistoffet til næste dag.

elisa
Trin 2.
Der vaskes, men en del antistof vil stadig sidde tilbage.

elisa
Trin 3.
I nogle brønde tilsættes ingenting, i andre forskellige kendte mængder af albumin og i resten af brøndene tilsættes vores ukendte prøve i forskellige koncentrationer. Albumin vil nu fanges af de antistoffer, der sidder i brøndene.

elisa
Trin 4.
Der vaskes igen.

elisa
Trin 5.
Til alle brøndene tilsættes et antistof, der er mærket med et enzym fra en peberrod. Det enzymmærkede antistof sætter sig på albumin. Jo mere albumin - jo mere enzymmærket antistof.

elisa
 

 Trin 6.
Der vaskes igen.

elisa
Trin 7.
Der tilsættes et substrat til alle brøndene. Hvis der er enzym i brøndene, vil der dannes en gul farve. Jo mere albumin jo mere enzym og jo kraftigere bliver den gule farve. 

elisa
Trin 8.
Den gule farve måles på et apparat, der kaldes for en ELISA-reader. Apparatet giver et tal for hvor meget gult farvestof, der er i hver enkelt brønd. Målingen for en hel bakke med 96 brønde tager kun få sekunder.

elisa
Trin 9.
Til sidst tegnes en kurve, der viser sammenhængen mellem den gule farve og koncentrationen af albumin. Kurven bruges til at bestemme koncentrationen af albumin i den ukendte prøve.

elisa
Trin 10.
Der laves en rapport over øvelsen. I løbet af 1½ år på skolen laves ca. 50 rapporter. ELISA-rapporten fylder ca. 3-4 sider og er en af de mellemstore rapporter.